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单克隆抗体如何获得,单克隆抗体是如何产生的

编辑:臻房小水日期:2025-05-12 07:04:41 浏览量(

摘要:单克隆抗体是通过杂交瘤技术获得的。首先,将已免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞。这些细胞既能够无限增殖,又能够分泌特异性抗体。然后,将杂交瘤细胞...

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单克隆抗体是通过杂交瘤技术获得的。首先,将已免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞。这些细胞既能够无限增殖,又能够分泌特异性抗体。然后,将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,使其产生大量抗体。醉后,从腹水中收集抗体,经过纯化后即可得到单克隆抗体。这种抗体具有高度的特异性和敏感性,能够与特定的抗原结合,广泛应用于医学、科研等领域。

单克隆抗体是如何产生的

单克隆抗体是如何产生的

单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAbs)是通过杂交瘤技术产生的。以下是详细的产生过程:

1. 免疫动物:

- 首先,选择一种特定的抗原(如肿瘤细胞表面的抗原)作为免疫原。

- 然后,将这种抗原免疫一只小鼠,通常使用的是小鼠,但也可以使用其他哺乳动物如大鼠或兔。

- 免疫过程使小鼠产生针对该抗原的B淋巴细胞。

2. 获取B淋巴细胞:

- 在免疫后,通过腹腔注射疫苗或其他方法使小鼠产生腹水,从而收集含有针对抗原的B淋巴细胞的腹水。

- 也可以通过脾脏组织分离获得B淋巴细胞。

3. 融合B淋巴细胞与骨髓瘤细胞:

- 使用聚乙二醇(PEG)或其他融合剂,将免疫的小鼠B淋巴细胞与同样来源于小鼠的骨髓瘤细胞融合。

- 融合后的细胞称为杂交瘤细胞,它们既具有免疫B淋巴细胞的特异性识别能力,又具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性。

4. 筛选杂交瘤细胞:

- 将融合后的杂交瘤细胞接种到培养基上进行培养,以筛选出能够持续分裂并分泌特定抗体的杂交瘤细胞。

- 这个过程通常涉及对培养基中的细胞进行染色和计数,以确定哪些细胞具有所需的抗体分泌能力。

5. 克隆化:

- 从筛选出的杂交瘤细胞中,通过有限稀释法或其他方法进行克隆化,以获得能够稳定分泌单一抗体的杂交瘤细胞株。

6. 抗体分泌:

- 经过克隆化后的杂交瘤细胞会在培养基上持续分泌特异性抗体。

7. 抗体纯化与鉴定:

- 分离得到的杂交瘤细胞培养液中的抗体需要经过纯化过程,以去除其他杂质成分。

- 纯化后的抗体可以通过各种生物化学方法进行鉴定,如免疫学方法、电泳分析等,以确认其特异性和亲和力。

完成上述步骤后,就可以获得针对特定抗原的单克隆抗体了。这些抗体在医学诊断、治疗以及科学研究等领域具有广泛的应用价纸。

单克隆抗体如何获得

单克隆抗体如何获得

单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAbs)是通过杂交瘤技术获得的。以下是获得单克隆抗体的主要步骤:

1. 免疫动物:

- 选择适当的动物种类,如小鼠、大鼠或兔。

- 将特定抗原(如蛋白质、多肽、细胞或组织)免疫动物,以刺激其产生针对该抗原的B淋巴细胞。

2. 获取B淋巴细胞:

- 从免疫后的动物中分离得到B淋巴细胞。

- B淋巴细胞具有特异性识别抗原的能力,并能分泌抗体。

3. 细胞融合:

- 使用聚乙二醇(PEG)或其他融合剂将B淋巴细胞与具有体外培养特性的骨髓瘤细胞(如小鼠骨髓瘤细胞L1-6.2)融合。

- 融合后的细胞既具有B淋巴细胞的特异性识别能力,又具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力。

4. 筛选杂交瘤细胞:

- 将融合后的细胞进行筛选,以选出能够持续分裂并分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。

- 筛选方法包括有限稀释法、ELISA法或免疫荧光法等。

5. 克隆化:

- 从筛选出的杂交瘤细胞中,通过有限稀释法或其他方法进行克隆化,得到单一的杂交瘤细胞株。

- 细胞株需要进一步验证其分泌特异性抗体的能力。

6. 抗体分泌:

- 将克隆化的杂交瘤细胞植入培养基中进行培养,使其大量分泌特异性抗体。

- 收获培养基中的抗体,通常通过离心、过滤等方法去除未分泌的细胞碎片和其他杂质。

7. 纯化抗体:

- 使用层析法、超速离心法或其他纯化技术对收获的抗体进行纯化,以提高其纯度和稳定性。

- 纯化后的单克隆抗体可用于后续研究、诊断或治疗。

通过以上步骤,可以获得针对特定抗原的单克隆抗体。这些抗体在科学研究、医学诊断和治疗等领域具有广泛的应用价纸。

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